視頻測量顯微鏡被稱為“視頻”,因為它將傳統的顯微鏡與攝像系統、顯微鏡或計算機相結合,這使得顯微鏡的觀察結果能夠以數據的形式長期存儲。今天的顯微鏡非常強大。它的智能化、人性化和可擴展性使視頻測量顯微鏡非常受歡迎。那么視頻測量顯微鏡應該如何調試呢?讓我們來看看。
1、在正式試驗過程中,應分別采用陽性對照和陰性對照控制試驗條件,并將試驗樣品一式兩份,以確保試驗結果的準確性。有時背景較高,表明存在非特異性反應,可以用羊血清、兔血清或BSA阻斷。
2.在ELISA中,各種實驗條件的選擇非常重要,包括:
(1) 固體載體的選擇:許多物質可用作固體載體,如PVC、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺和纖維素。形式可以是凹板、試管、珠等,目前常用的是40孔聚苯乙烯凹板。無論是哪種載體,都可以在使用前進行篩選:用相同量的抗原包被,在相同的實驗條件下反應,觀察其顏色反應是否均勻,判斷其吸附性能是否良好。
(2) 涂層抗體(或抗原)的選擇:當抗體(或抗體)吸附在固體載體表面時,要求純度良好,PH值通常要求在9.0至9.6之間。吸附溫度、時間和蛋白質含量也有一定影響,一般為4℃18-24小時。需要滴定蛋白質涂層的適當濃度:不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μG/ml等),在其他測試條件相同的情況下觀察陽性樣品的OD值。選擇OD值高、蛋白質含量低的濃度。大多數蛋白質通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標抗體工作濃度的選擇:首先,用直接ELISA滴定初始滴度(見酶標抗體部分)。然后固定其他條件或使用“方陣法”(涂層的不同稀釋度、待測樣品的參考物和酶標記抗體)在正式實驗系統中準確滴定其工作濃度。
(4) 酶底物和供氫體的選擇:供氫體選擇的要求便宜、安全、顯色反應明顯,但無色。一些氫供體(如OPD等)具有潛在的致癌作用,應予以保護。合格者應使用非致癌和敏感的氫供體,如TMB和ABTS,這些供體目前相對令人滿意。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿終止反應。通常,基材作用時間為10-30分鐘。